降解组建库流程

1 miRNA切割以后mRNA在第十或第十一个碱基产生两个片断，第一个片断是5'帽子结构和3'羧基。3'剪切片断包含自由的5'单磷酸和3'poly(A)尾巴。

2 利用5'adaptor能够与5'单磷酸基团的RNA链接，而缺少5'单磷酸的基团没法链接捕获miRNA的切割产物，随后使用oligo(dt)3'-adapter将连有5'-adaptor的3'切割产物反转录成cDNA，扩增cDNA后，使用限制性内切酶Mme I对PCR产物进行酶切，酶切长度在20-21bp。将酶切后的3'双链DNA adaptor链接并进行PCR扩增，产物凝胶纯化以后，创建一个包含经miRNA切割的3'端剪切片断文库，用于测序。