ImageJ实用技巧——荧光&明场图片合并和分割(基本功能篇)

拍免疫荧光或者荧光转染的时候，必定会遇到不一样颜色荧光照片合并与分割，以及荧光和明场照片的合并问题。

虽然大部分状况下，拍照软件会完成这一工做，但若是想对某一颜色的图片进行修改，而后再合并，或者提取某一个通道的照片，这时候就须要ImageJ了。

ImageJ中的这一功能较为基础，不须要插件，做为基础功能篇的第一篇，主要介绍怎么利用ImageJ对荧光照片合并、分割，以及荧光与明场之间合并。

 

1、不一样荧光照片合并、分割

（1）合并

一、打开待合并的图像

三张不一样颜色的荧光图像

 

二、合并不一样颜色通道（Image-Color-Merge Channels）

弹出Merge Channels界面：

总共有7个颜色通道，每一个颜色选择对应的照片，点击OK。出现合并后的图像（Composite）。

但这时候的合并图像只是三个8-bit的Stacks，若是要保存的话须要把图像转换为RGB模式。

左右调节工具条，发现左上角的颜色信息会变，可是图片依然是合并后图像

Tips：若是想要更改某一颜色通道，可使用Channels Tool（Image-Color-Channels Tool），选择不一样通道后，对单一通道进行修改，不影响其余通道。

选择不一样Channel，能够呈现不一样颜色

 

三、生成RGB的合并图像（Image-Color-Stack to RGB）

生成一张命名为Composite的RGB图像：

命名为Composite的RGB图像

注意：这里必定要Stack to RGB，不然保存后的图片并非Merge后的状态。

 

四、保存图片（File-Save）

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（2）分割

一、打开一张RGB图像

 

二、将RGB图像转换为Composite图像（Image-Color-Make Composite）

这时候三种颜色通道都已经分离出来了。这一步是为了后面能直接分割出三个带有伪彩的通道。若是直接Split Channels，也会获得三个通道，可是没有伪彩。

 

（3）分离不一样颜色通道的图片（Image-Color-Split Channels）

 

（4）分别保存图像（File-Save）

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2、荧光与明场之间合并

作siRNA、慢病毒等转染实验时，须要统计细胞的转染效率。同一视野下，分别拍摄荧光和明场的照片，这时候就须要将荧光和明场照片合并，易于计算带有荧光标记的细胞。

一、打开荧光和明场图像

 

二、合并不一样颜色通道（Image-Color-Merge Channels）

与荧光照片合并的惟一不一样是：明场照片选择gray通道：

Tips：若是荧光较弱，能够单独对荧光照片增长亮度和对比度（Image -> Adjust -> Brightness/Contrast）。

三、生成RGB的合并图像（Image-Color-Stack to RGB）

四、保存图片（File-Save）